 |
如何选择超滤产品
|
| |
赛多利斯提供了可满足各种超滤要求的膜，选择超滤膜主要根据膜的材质，截留分子量以及综合性能等，但是应注意，膜的最终性能还取决于所需进行超滤的溶液的特性，建议采用不同的膜进行实验，以选出最适合的膜。 |
|
|
不同材质超滤膜的特点
|
| |
 |
聚醚砜
(Polyethersulfone)
|
|
三醋酸纤维素
(Cellulose Triacetate)
|
| |
|
这是一种用于常规目的的滤膜，尤其在回收大分子截留物时，可以得到极好的收率。聚醚砜具有较高的化学和热稳定性，通量大，流速快，耐碱能力强(pH范围1
~ 14) |
|
也是一种高度亲水的膜，对蛋白的吸附极低，用于从低蛋白浓度的稀释液中回收蛋白时，可以得到极高的收率。再生纤维素可以高压灭菌，容易清洗，耐酸碱性能及耐溶剂性能好 |
| |
|
再生纤维素
(Regenerated Cellulose)
|
|
Hydrosart
(Hydrosart)
|
| |
|
这种膜亲水性强，非特异性吸附极低，溶剂和小分子溶质在滤过时不会因被膜吸附而产生损失，因此在样品清洗、除蛋白以及其它需要回收滤过液的操作中，建议使用 |
|
Hydrosart超滤膜是赛多利斯的产品，它的基本特性与再生纤维素类似，具有极低的蛋白吸附特性的同时，又具有高流速和高通量的特性，是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜 |
|
|
不同材质及截留分子量(MWCO)的超滤膜性能比较
|
| |
|
超滤膜 |
相对流速(ml/min/cm2) |
性能特点 |
|
聚醚砜，pH范围1 ~ 14 |
|
3,000 MWCO |
0.05 |
肽的回收率高 |
|
5,000 MWCO |
0.24 |
肽的回收率高，流速较快 |
|
10,000 MWCO |
0.41 |
应用范围广，流速快，吸附低 |
|
30,000 MWCO |
0.41 |
应用范围广，流速快 |
|
50,000 MWCO |
0.45 |
精确的截留分子量限 |
|
100,000 MWCO |
0.35 |
免疫球蛋白的收率高 |
|
三醋酸纤维素，pH范围4 ~ 8 |
|
5,000 MWCO |
0.04 |
去除肽和蛋白 |
|
10,000 MWCO |
0.11 |
微小组分，游离/结合药物研究 |
|
20,000 MWCO |
0.58 |
样品清洗，HPLC样品制备 |
|
再生纤维素，pH范围3 ~ 11 |
|
10,000 MWCO |
0.18 |
微克量蛋白质的高效回收 |
|
30,000 MWCO |
0.58 |
免疫球蛋白的快速和高效回收 |
|
100,000 MWCO |
0.40 |
蛋白质梯度分离 |
|
Hydrosart，pH范围3 ~ 11 |
|
5,000 MWCO |
0.14 |
稀释液的高效回收 |
|
10,000 MWCO |
0.27 |
流速快，收率高，吸附低 |
|
30,000 MWCO |
0.48 |
免疫球蛋白的收率高 |
*. 0.25mg/ml牛血清(BSA)或免疫球蛋白(IgG)，在4
bar压力下，透过相应MWCO膜所测得的流速
|
|
|
不同截留分子量(MWCO)的超滤膜选择指南
|
| |
|
应用/分子量 |
<5,000 |
10,000 |
30,000 |
50,000 |
100,000 |
>300,000 |
|
细菌 |
|
|
|
|
X |
X |
|
DNA片段 |
|
X |
X |
X |
X |
|
|
酶 |
X |
X |
|
|
|
|
|
生长因子 |
X |
X |
|
|
|
|
|
免疫球蛋白 |
|
|
X |
X |
X |
|
|
核酸 |
X |
X |
X |
X |
X |
|
|
单克隆抗体 |
|
|
X |
X |
X |
|
|
寡聚核苷酸 |
X |
|
|
|
|
|
|
肽 |
X |
|
|
|
|
|
|
病毒 |
|
|
X |
X |
X |
|
|
酵母菌 |
|
|
|
|
X |
X |
*. 为了得到高的收率，所选滤膜的MWCO要小于或等于所需截留分子大小的一半
|
|
赛多利斯的Vivascience系列超滤产品，采用了先进设计和低吸附材质，同时具有超滤速度快和收率高的优点，当超滤器的大小和膜的截留分子量选择适
当时，回收浓度大于0.1mg/ml的溶质，收率可达90%以上。大部分样品损失是由于滤膜表面和样品容器的非特异性吸附引起的。 |
滤膜吸附
|
|
滤膜表面样品的吸附量，与样品的性质以及所选用的滤膜材质有关，一般为2~10μg/cm2。如果研究的对象是滤过液，由于其滤过时要穿过滤膜的整个内部结构，所以吸附量相对较大，为20~100μg/cm2。通常截留分子量高的膜吸附较高，而截留分子量低的膜吸附较低。 |
容器吸附
|
|
生产超滤器时，通过选用低吸附材质，精细抛光，已最大限度地降低了吸附性，但仍有一些溶质会被容器内壁吸附。与滤膜吸附相比，这种吸附的比例很小，但当容器内壁的表面积相对较大时，也可能成为产品损失的主要原因。 |
|
|
如何提高收率
|
| |
当需要较高的收率时，尤其当研究的样品对象在微克范围时，建议应考虑以下几点： |
|
|
根据样品处理量，选择最小可用的超滤容器，可以充分利用Vivascience产品滤过速度快的优势，在小容器中反复添加样品，反复超滤 |
|
|
在适量范围内，选截留分子量最低的超滤膜 |
|
|
如可能，使用水平转头代替角转头离心，这样可减少在离心过程中溶液与离心管接触的表面积 |
|
|
将压力或离心力降低到大约最大推荐数值的一半 |
|
|
避免过度浓缩，最终体积越小，越难得到完全回收，如可能，在第一次回收后，用一滴或多滴缓冲液润洗容器，然后再次回收 |
|
|
用溶于蒸馏水中的5%SDS、Tween 20或Triton X预先浸泡超滤容器过夜，然后在使用前彻底润洗 |
