核酸相关服务项目
基因组DNA及RNA提取
从新鲜组织、血液、细胞、细菌等多种材料中提取基因组DNA,提取的基因组DNA量因材料种类不同而不同,且差异较大,现就一般材料的基因组DNA提取做归纳。由于技术服务部分客户定制性较高,样品差异度较大,具体价格请来电咨询。
质粒提取
质粒在分子生物学实验中是不可缺少的工具,我们为您提供各种级别的质粒提取,满足不同的实验需求。
- 普通质粒提取:提取产物可满足PCR扩增、测序、限制性酶切和转化等常规实验的需要;
- 转染级质粒提取:质粒提取过程中,由于革兰氏阴性细菌自溶或者其他原因的破坏,会从其细胞壁上释放出毒性脂多糖,即内毒素,影响细胞转染的效率。
实验包括:PCR产物回收、连接转化、克隆鉴定和质粒提取。
客户需提供甘油保存的菌种或新鲜菌液,并注明菌种和质粒的类型和抗生素抗性。
最终产品:质粒提取样品,完整实验报告(电泳图及OD值测定结果)。
PCR反应
客户提供模板(基因组DNA,质粒模板),引物(至少20次50 μl PCR反应用量),请注明扩增产物的用途。
T-PCR反应
提供提取用材料(组织、细胞等),注明所提材料来源与类型。提供所需基因的引物。我们提供提取的RNA,电泳图片,第一链cDNA产物或PCR产物。
基因克隆
将外源基因与克隆载体进行体外连接,转化大肠杆菌,筛选含有目的基因重组质粒的转化子,并将该转化子大量扩增提取重组质粒,这个过程称之为基因克隆。客户需提供新鲜的PCR产物或胶回收产物,并注明PCR扩增所用模板的来源。我们提供给客户三个阳性克隆(不包括阳性克隆的测序)。
载体构建
首先,从克隆载体上酶切下目的基因片段,再将目的基因亚克隆至原核表达载体中的过程,称之为载体构建。提供外源DNA片段的来源及载体,载体图谱,抗性要求,并注明酶切位点,我们提供两个阳性克隆,并附PCR鉴定和酶切鉴定结果的图片(不包括阳性克隆的测序)。
材料种类 样品要求 起始量 DNA产率 RNA产率 血 液 新鲜血液及经抗凝剂处理的全血 200 μl 4 μg 左右 1 μg 左右 培养细胞 细胞悬液或离心收集的细胞 1×107 10 μg 左 1-10 μg 左右 细 菌 对数生长期的大肠杆菌菌液 1 ml 6 μg 左右 1-10 μg 左右 动物组织 新鲜的常规组织样品 30 mg 5-20 μg 5-50 μg 植 物 新鲜叶片 100 mg 1-20 μg 10-60 μg
蛋白表达及纯化服务
原核表达系统(Bacteria Expression System)常规蛋白表达的首选系统:具有遗传背景清晰、表达水平高,多种标签选择(HIS/MBP/GST/TRX等)以及菌株稳定等优点。我公司在大肠杆菌表达系统可制备克级以上蛋白。
蛋白表达及纯化服务(原核表达系统)
蛋白表达及纯化服务(哺乳动物细胞表达系统)
服务编号 MPE01 MPE02 MPE03 服务内容 目的基因亚克隆及鉴定 瞬时转染,试表达及纯化 稳定表达细胞株建立,
蛋白小量表达及纯化最终产品 20 μg含目的基因的
表达质粒 +项目报告50~100 μg蛋白,
纯度≥85%+ 项目报告
(Western blot检测结果)1~2个细胞株,纯度≥85%的
蛋白+项目报告
(Western blot检测结果)客户提供 5 μg含目的基因的质粒 5 μg含目的基因的
表达质粒,Western 检测
需提供, 特异性一致含目的基因的
表达质粒,Western 检测
需提供, 特异性一抗哺乳动物细胞表达系统(Mammalian Cells Expression System)表达出的蛋白最接近人体内天然形式,利用我公司自主研发的高效表达系统和筛选报告系统,可以满足不同表达需求,并获得高产量的蛋白和稳定表达的细胞株。
酵母表达系统(Yeast Expression System)表达量高,蛋白可以分泌到胞外并稳定表达,具有类似高等生物细胞的翻译后修饰功能(如糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等)是酵母表达系统的主要优点。我公司的毕赤酵母表达系统可制备克级以上蛋白。
杆状病毒-昆虫细胞表达系统(Baculoviruses-Insect Expression System)杆状病毒是一种高产量的真核基因表达载体,通过制备表达用病毒侵染昆虫细胞,外源基因产物可以在胞内表达或分泌表达,比如大肠杆菌表达系统更容易获得有正确结构和修饰的活性蛋白。
服务编号 PPE01 PPE02 PPE03 服务内容 目的基因亚克隆及鉴定 蛋白质表达及常规优化 蛋白小量表达及纯化 最终产品 20 μg含目的基因的表达质粒
项目报告1-2个含目的基因的表达菌株
项目报告5-10 mg 纯度≥85%的蛋白
项目报告客户提供 5 μg含目的基因的质粒 5 μg含目的基因的质粒 5 μg含目的基因的质粒