1、D-荧光素适合做哪些实验?
D-荧光素钾盐和5-氟-荧光素，作为Luciferase的作用底物，常用于以下实验：
1. 报告基因分析
2. In vivo imaging (动物活体成像)
3. In vitro imaging (细胞体外分析)
4. ATP测定
5. 其它luciferase及其基因相关的分析和研究工作
2、D-荧光素应用于活体成像的基本原理
细胞中D-荧光素酶参与的化学发光反应遵守酶促反应的基本原理，在底物D-荧光素钾过量的情况下，反应产生的光子数（发光量）与细胞中的D-荧光素酶的量成正相关，从而可以推算出细胞的数量。
3、D-荧光素钾盐溶液的稳定性
D-荧光素钾盐易溶于水和缓冲液，溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。
溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6 5="">7.5（发生消旋化作用，D型转化为L型）的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。
D-荧光素配成溶液后，在最佳的保存条件（-80°C，最佳pH，无氧气）下，存在固定的降解速度：0.2%/天，因此配成溶液保存的D-荧光素应尽量在1年内使用完。
有水存在的情况下，主要发生消旋化作用，即D-荧光素转化成L-荧光素，有报道称L-荧光素对荧光素酶催化的酶促反应有抑制作用。
4、D-荧光素、D-荧光素钠和D-荧光素钾之间的区别
主要区别在于溶解和分散性能。D-荧光素钾盐在水和缓冲液中的溶解度高，且溶解速度较快，故在一般的生物学试验中常用D-荧光素钾盐。
5、D-荧光素钾盐的保存和运输条件
保存条件：≤-20°C，避光，保持干燥。（在不打开包装的条件下，可保存两年时间）。
运输条件：高纯度的D-荧光素钾可在短时间内常温条件下保存，运输条件为常温。
原装（没有打开包装）荧光素的包装瓶中充有氩气，保证其稳定性，打开包装后，请严格按照保存条件保存。
D-荧光素钾盐具有易溶于水的特性，其暴露于空气中，易吸潮。在称量过程中，请考虑其易吸潮的特性，先进行温度平衡，再快速称取。
产品介绍：
D-荧光素钾盐
CAS#：115144-35-9
中文名：D-荧光素钾盐
英文名：D-Luciferin, potassium salt
生产厂家：BIOSYNTH
货号：L-8220
规格：250mg/1g/10g
构式：
分子式：C11H7N2KO3S2
分子量：318.41
性质：
1. 外观：黄色粉末
2. 纯度：≥99% (HPLC)
3. 产品描述：
D-荧光素(D-Luciferin)是萤火虫荧光素酶底物，其量子效率为0.88，是Luminol的20倍。反应原理：首先，在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应，接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及细菌计数。它还用于报告基因检测。可与小动物活体成像系统配套使用，用于标记LUC基因后的体内活体荧光检测。
4. 应用
(1) 体外分析
(2) 活体成像分析
(3) 高灵敏度ATP分析
使用方法
1. 活体成像分析方法
(1) 用DPBS(w/o Mg2+、Ca2+)配置D-Luciferin工作液(15mg/mL)* ，0.2 μm滤膜无菌过滤。
(2) 注射量：10μL/g的体重，如10g 重小鼠，注射100μL 工作液(1.5 mg D-Luciferin)。
(3) 腹腔注射10～15分钟后，上机进行图像分析。
2. 体外分析方法
(1) 用无菌水配置200× 的D-Luciferin储备液(30mg/mL)*，立即使用，或-20℃保存。
(2) 用预热好的完全培养基1∶200稀释D-Luciferin储备液，配置工作液(150μg/mL)。
(3) 去除培养细胞的培养基。
(4) 进行图像分析前，向细胞中添加1× 的D-Luciferin工作液，进行图像分析**。
* ：溶解D-Luciferin时要完全。
**：在图像分析前，将细胞进行37℃的短时间培养可以增加信号强度。
